Paso 1: Más sobre PCR
Polimerización en cadena consiste en 3 pasos que son ciclos una y otra vez:
Desnaturalización (94 ~) en este paso, DNA 'roturas aparte', partiendo de una doble hélice en solos filamentos
Recocido (~ 60 ° C) bonos de cebadores al ADN monocatenario
Extensión (~ 72) complementa de polimerasa del ADN, síntesis de hebras de la secuencia de destino
Cada una de estas fases puede ser 20-30 segundos larga y repetidas 30 veces, dependiendo del protocolo. Mayoría de los protocolos también sugiere tener un paso de desnaturalización inicial más larga y un paso de extensión final más largo.
Un sencillo tutorial:
http://www.DNALC.org/resources/Animations/PCR.html
También hay un montón de recursos relacionados aquí: http://www.lab-manual.com/lm_209.htm
Los resultados de PCR se pueden visualizar usando la electroforesis del gel. Muestras de ADN se cargan en un gel y se aplica un alto voltaje a través de él. Porque el ADN está cargado negativamente, viajará a través del gel a velocidades diferentes dependiendo de su tamaño. Este proceso efectivamente se separará hacia fuera las piezas que desee, y puede verlos por la coloración del gel. Aquí hay un buen tutorial y si estás tratando de bricolaje lo, el Proyecto de Macgyver es un recurso bastante bueno.
PCR se puede realizar con 3 baños (cada uno mantenido en uno de los valores de temperatura de tres). Un ser humano podría físicamente hacia las muestras de un baño la siguiente 30 veces. Máquinas PCR fueron desarrolladas para automatizar el proceso, pero la mayoría los de calidad de laboratorio cuestan miles de dólares. Pero no es necesario! Hoy en día existe un creciente número de proyectos de la polimerización en cadena de open source, entre ellos OpenPCR (600$), LavaAmp ($200) y la PCR de la taza de café (350$).