Con el fluorómetro para cuantificar dsDNA (9 / 11 paso)

Paso 9: Fluorómetro hoja de Microsoft Excel

1. en el escritorio a la derecha del fluorómetro, haga clic en la hoja de Microsoft Excel titulada fluorómetro

2. hoja en el Excel, inserte el valor de Fluorímetro para dilución estándar 1 (tubo 1) bajo la columna "0": célula (Figura 1). Este debe ser el valor más bajo de Fluorímetro.

3. entrar los valores estándar de Fluorímetro 11 restantes en la columna correcta como se observa en la figura 1. Allí debe ser una disminución en valores procedentes al mover hacia abajo la fila. Si uno de los aislamientos no sigue este patrón, sería mejor quitar ese punto de los otros 10 estándares.

4. una vez que se introducen todos los 11 estándares, ecuación de regresión lineal y R ^ 2 aparece (Figura 2)
a. A Compruebe que los puntos de la línea corresponden a los datos en las celdas, haga clic en uno de los puntos en el gráfico. Una selección
cuadrícula aparecerán en algunas de las células. Debe seleccionarse celdas A8-J8 (no incluyen K8 ).
b. cualquier r ^ 2 valor por debajo de 0,99 es inaceptable y normas deben ser rehecho (ir hacia la Creación de estándares de dilución de ADN )
c. registrar el r ^ 2 el valor y la ecuación de la línea en el cuaderno de Fluorímetro

Una cosa importante a mirar es si los puntos busca cantante (Figura 3). El último punto está empezando a mostrar una ligera curvatura que indica saturación. Esto puede suceder debido a incrementos dramáticos en el ADN estándar de un estándar a la siguiente (de 20ul a 50ul). Esto generalmente no será un problema mientras hay aumento más gradual de ADN stnadards (20ul; 40ul; luego 50ul).

Puede producirse incluso con estas precauciones, sobre saturación. Generalmente para solucionar la saturación, quitar el punto que causa la curva lo fija (Figura 4). En este caso fue el punto más alto.

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