Paso 3: Añadir un antibiótico
Agregamos el antibiótico para asegurarse de que sólo nuestra bacteria con el gen de interés (GoI) está presente en la cultura. Esto se hace mediante el uso de un antibiótico que la bacteria es resistente a ya que tenemos un gen protector que está justo al lado de nuestro GoI. Por lo tanto, algunos de los antibióticos, kanamicina, añadimos a una alícuota de 50 mL. Los pasos se presentan a continuación y es importante estar en las cercanías de la llama para mantener un ambiente estéril. La llama crea un entorno caliente para evitar que las bacterias en un caldo LB y flujo de aire hacia arriba. Utilizar el video como referencia para completar los siguientes pasos:
- encender la hornilla de Bunsen en un espacio abierto sobre su mesa de laboratorio
- pre-Desenroscar el tapón en el tubo cónico de 50 mL
- Quite la tapa de la botella de mL 500 LB; no poner en la mesa de laboratorio y mantener cara
- "llama" el labio poniendo ligeramente cerca de la llama
- Coloque la botella hacia abajo cerca de la llama mientras todavía sostiene la tapa de
- aspirar un caldo con la ayuda de una pipeta
- Vuelva a colocar la tapa sobre la botella LB
- recoger el tubo cónico y desenrosque y retire la tapa con una mano (la ayuda de la pipeta debe estar en otra parte)
- ligeramente la llama este labio (cuidado de no quemar o derretir cualquier cosa)
- Añadir el caldo y vuelva a colocar la tapa en el tubo
- repetir tantas veces como sea necesario para agregar 50 mL, asegurándose de permanecer cerca de la llama
- ahora añadir 5 microlitros de kanamicina (mi kanamicina es 50 mg/ml para empezar por lo que se agrega la cantidad puede cambiar dependiendo de su concentración inicial) a la alícuota LB en una manera similar como cuando tomar el caldo (no es necesario a la kanamicina, la llama aunque)
- tapa y mezcla o vórtice la solución
