GFP:
La proteína fluorescente verde (GFP) es una proteína que presenta fluorescencia verde brillante cuando está expuesto a la azul a la luz ultravioleta. GFP primero fue aislada de la medusa Aequorea Victoria por el científico Japon Osamu Shimomura (ganó el Premio Nobel de química en 2008 por el descubrimiento y desarrollo de GFP) en 1961. GFP había sido ampliamente utilizado en el etiquetado de los organismos para propósitos de identificación. Cuando la GFP se entrega dentro de la célula, la célula se fluorescencia bajo microscopía de fluorescencia. En este instructable usaré gWiz GFP.
Transfección:
La transfección es el proceso de poner los ácidos nucleicos en las células para bloquear o expresar algunas funciones de la célula. Transfección puede dividirse en sustancias químicas de la transfección (Lipofectamine 2000 por Life Technologies es el más común), transfección no químicos (electroporación es la forma más común) y transfección basada en partículas como magnetofection. Es muy difícil transfectar células totalmente polarizadas o completamente diferenciadas mediante método químico. Trasnfection químicas y transfección basada en partículas presentarán cosas adicionales (tales como lípidos, polímeros y nanopartículas magnéticas) además de los ácidos nucleicos buscados en las células durante la transfección, y las materias extras podrían crear resultados no deseados o inesperados después de transfección. En electrodeporation, la membrana celular se abrirá un montón de pequeños agujeros bajo la fuerza de electrodo, y los ácidos nucleicos puede entrar en la célula a través de esos agujeros. Electroporación tradicional aplica un voltaje muy alto (cientos de miles de volts) en suspensión de células. Mata a un montón de células, y células adherentes, sus características son diferentes en suspensión celular y en la capa de la célula. Las células adherentes, transfección in situ proporcionará el mejor resultado ya que las células están en estado de postmeitotic fisiológicamente relevantes. En este instructable que se transfectar completamente MDCK-G (células de riñón canino Madin-Darby) células diferenciadas in situ mediante el sistema de electroporación llamado iPorator por primax biosciences. Esta máquina utiliza una pequeña corriente en lugar de un alto voltaje durante la transfección para reducir el daño celular. Durante de la transfección, las células están creciendo en la inserción de la membrana porosa (no re-suspensión necesaria). Este sistema es mejor para las células adherentes. Sin embargo, este sistema no funciona para las células de suspensión.
