Paso 6: montaje
Una vez que llegaron todos los productos químicos y ADN y la estequiometría fue completa, llegó el momento de montar las nanoestructuras. Se utilizaron los siguientes métodos.
Métodos
- Crear 1 X Buffer Añadir 20 μl 10 buffer de X a tubo de 1.5 ml
- Resuspender las grapas Añadir 625 μl agua a cada grapa de placa de 96 pozos
- Grapas de piscina Añadir 1 μl por grapa para tubo de 1,5 ml.
- Andamio de piscina Agregar 40 μl andamio tubo de 1.5 ml
- Agregue el agua Agregar 17 de uL de agua al tubo de 1,5 ml.
- Añadir MgCl Añadir 12 μl de MgCl
- Thermocycle Recocido de 95 ° C a 20 ° C en una máquina PCR 1 ° C por minuto en pasos de 0,1 ° c.
Notas importantes
- Es importante agregar el MgCl último debido a las interacciones entre los cationes y el ADN
- Es importante calentar la parte superior del termociclador a 105 ° C para evitar la gradiants de la temperatura en el sistema. Si la temperatura de la parte inferior del termociclador es alta y la temperatura de la parte superior del bajo, el sistema se evaporará en la parte inferior y las sales se placa de la solución, llevando a una sustancia cristalina blanca no deseada que aparecen en la parte inferior del tubo
Métodos alternativos
Aunque se utilizó un termocicladorde estándar, hay varias otras maneras que usted podría hacer el paso de recocido. Una sería montar su propio y utilizarlo, teniendo en cuenta la nota de calefacción para asegurarse de que no te evaporación. O, si es probablemente posible sólo armar el origami por recocido el ADN en agua caliente! Mezclar el ADN y kit químicos como se describe anteriormente pero en vez de usar un termociclador a Recueza el ADN, hervir el agua (100 ° C) y añadir los tubos. Asegúrese de que estén completamente sumergidos y apaga el fuego en la estufa. Deje que el agua enfríe los tubos sumergidos. Esto debe imitar el proceso de termociclaje rápido, pero será menos preciso sobre la rampa de temperatura exacta.
